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江苏睿捷生物科技有限公司是2011-11-21在江苏省苏州市注册成立的有限责任公司,注册地址位于苏州工业园区东平街286号浩辰大厦206室。
江苏睿捷生物科技有限公司的统一社会信用代码/注册号是913205945866079179,企业法人周玮,目前企业处于开业状态。
江苏睿捷生物科技有限公司的经营范围是:生物技术领域内的开发、技术转让、技术咨询;研发、销售:实验耗材、实验试剂、塑料制品、玻璃仪器、化工产品、电器设备、生化设备;批发二类医疗器械;三类医疗器械:6815注射穿刺器械,6821医用电子仪器设备(不含植入性心脏起搏器),6840临床检验分析仪器(不含体外诊断试剂),6841医用化验和基础设备器具,6854手术室、急救室、诊疗室设备及器具,6858医用冷疗、低温、冷藏设备及器具,6866医用高分子材料及制品。(依法须经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动)。在江苏省,相近经营范围的公司总注册资本为232424万元,主要资本集中在 100-1000万 规模的企业中,共1078家。本省范围内,当前企业的注册资本属于良好。
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Taq DNA聚合酶的特点及应用介绍
点击次数:1975 发布日期:2022-4-28 来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负
酶是一类极为重要的生物催化剂,具有催化高效性和反应特异性。绝大多数生化反应均需要酶的参与,核酸检测也不例外。不同类型的分子酶在核酸检测的不同实验阶段发挥了重要的作用。
一、逆转录酶,分享该酶的特点和应用
逆转录(reverse transcription)是以RNA为模板合成DNA的过程,即RNA指导下的DNA合成。此过程中,核酸合成与转录(DNA到RNA)过程与遗传信息的流动方向(RNA到DNA)相反,故称为逆转录。逆转录过程由逆转录酶催化。
大多数逆转录酶都具有以下几种活性。
①DNA聚合酶活性;
以RNA为模板,催化dNTP聚合成DNA的过程。逆转录酶的合成能力决定了产生的cDNA链的长短,一些基因工程改造的MMLV逆转录酶在单个结合位点中可以结合多达1,500个核苷酸,结合能力大概是野生型MMLV逆转录酶的65倍。
逆转录酶中不具有3'→5'外切酶活性,因此没有校正功能,所以由逆转录酶催化合成的DNA出错率比较高,基于MMLV的逆转录酶错误率在合成15,000到27,000个核苷酸中有一个错误核苷酸。
②RNase H活性;
由逆转录酶催化合成的cDNA与模板RNA形成的杂交分子,将由RNase H从RNA 5'端水解掉RNA分子。但是RNase H活性的存在可能降低逆转录效率,所以工程化的逆转录酶,通常会降低甚至消除RNase H活性,以提高cDNA合成效率。
③DNA指导的DNA聚合酶活性;
以逆转录合成的第一条DNA单链为模板,以dNTP为底物,再合成第二条DNA分子。
除此之外,工程化的逆转录酶都具备一定的温度耐受性,有助于使具有坚固二级结构和/或高GC含量的RNA变性,使得逆转录酶能够读取序列,增加cDNA合成长度,提高合成效率。
GenFQ III Reverse Transcriptase是经过基因工程改造的新一代逆转录酶,大幅提高了热稳定性,无RNase H活性。可以在42-55℃(高温有利于打开RNA二级结构)条件下合成第一链cDNA,最佳反应温度为50℃。具有灵敏度高、特异性高、聚合能力强、 热稳定性强和半衰期长特点。该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。
合成效率为95.1%,证明cDNA的合成效率较高,而且RNA梯度稀释线性关系良好。
热稳定能力强,热稳定7d对反转录效率无影响
二、Taq DNA聚合酶
PCR技术改变了现代分子生物学,而Taq DNA聚合酶改变了PCR。Taq DNA聚合酶是一种从Thermus aquaticm分离出的耐热型DNA 聚合酶,主要应用在直接PCR、等位基因检测、Sanger测序、TA克隆等领域。
Taq DNA聚合酶改具有良好的耐热型,最适催化温度在75-80℃,95℃半小时后仍保留50%以上的活性。Taq DNA聚合酶是少数具有5'-3'外切核酸酶活性的DNA聚合酶之一。能够切除5’端放射性标记的DNA探针,通过放射性信号的变化,实现PCR产物的特异性检测。
但是普通的Taq DNA聚合酶22°C时仍然有很低速的核酸合成,大约为0.25核苷/秒/酶分子,也就是说引物还没有正常配对,而酶已经催化了合成,会产生非特异性扩增。
基于Taq DNA聚合酶开发的热启动Taq DNA聚合酶,利用酶的修饰物在常温下抑制DNA聚合酶的活性,加热到变性温度时修饰物失活,酶活得以释放,从而使PCR反应正常进行,解决了PCR反应中引物二聚体产生或错配引起的非特异性扩增等问题,提高了PCR反应的特异性。
济凡生物Flash Robust HotStart DNA Polymerase?(A210)是基于野生型Taq DNA聚合酶定向化改造得到的新型热启动酶,采用双抗体封闭,有效防止错配或引物二聚体引起的非特异性扩增,有效抑制探针降解产生的荧光信号下降,具有超高的扩增效率、较高的扩增灵敏度(可达个位拷贝数扩增)和特异性,具有较强的血液及PCR抑制剂耐受性。适用于各种基于Taq DNA Polymerase的热启动PCR、qPCR反应,可用于从复杂模板(基因组和cDNA)中扩增低拷贝基因,可用于血液直扩等直接扩增PCR。
以非瘟质粒为模板,进行9个10倍梯度稀释,第9个稀释梯度中质粒拷贝数浓度约为6 copies/2μl。对各稀释梯度进行检测,每孔模板使用量为2μl。可以看到,A210在宽广的模板量区间内具有优秀的线性关系,可以轻松检测出个位数拷贝的待测模板。
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